Biozellen®高濃度小鼠皮下成瘤基質(zhì)膠試劑盒

產(chǎn)品貨號: B-P-00004-2、B-P-00004-4、B-P-00004-5、B-P-00004-10

產(chǎn)品規(guī)格: 2ml-kit、4ml-kit 、5ml-kit 10ml-kit

產(chǎn)品品牌:Biozellen

產(chǎn)品價格:詢價

產(chǎn)品概述：

Biozellen®高濃度小鼠皮下成瘤基質(zhì)膠試劑盒

Catalog             No B-P-00004-2、B-P-00004-4、B-P-00004-5、B-P-00004-10

Specification     2ml-kit、4ml-kit 、5ml-kit   10ml-kit     

Storage    4℃保存、 保存兩年

一、產(chǎn)品描述

  Biozellen®3D 高濃度小鼠皮下成瘤基質(zhì)膠試劑盒是以合成生物原料構(gòu)建細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境,無人畜共患病源菌及內(nèi)毒素風(fēng)險、高活性、高穩(wěn)定性、高生物兼容性及安全性、室溫即可操作、注射容易、可自由調(diào)整膠體硬度，應(yīng)用于各種小鼠癌癥模型的成瘤試驗

二、應(yīng)用

•應(yīng)用于各類癌癥模型的 in vivo 成瘤試驗

三、適用細(xì)胞種類

• 一般細(xì)胞株

• 腫瘤細(xì)胞株
• 腫瘤免疫細(xì)胞株

四、試劑盒組分

五、小鼠皮下成瘤試驗步驟：

操作流程圖

【細(xì)胞房材料、試劑及膠體準(zhǔn)備步驟】

(1)材料準(zhǔn)備步驟

• 37 ℃ 水浴槽或培養(yǎng)箱

       • MH膠 (1X)

       • R緩沖溶液 (1X)

       • 不含血清的DMEM培養(yǎng)液

       • 24G 針頭

       • 1毫升針筒

       • 癌細(xì)胞株

 （2）試劑準(zhǔn)備步驟

1、MH膠  (1X)制備步驟:將MH膠  (1X)置于37  ℃水浴槽或是培養(yǎng)箱回溫至少10分鐘，確認(rèn)完全溶解。

注1:為確保溶解后的膠體流動性，請在進(jìn)行MH膠添加步驟時，再將MH膠從37 ℃水浴槽或是培養(yǎng)箱拿出，可降低膠體的黏稠度。

注2: MH膠為單次使用，勿重復(fù)冷凍解凍膠體；建議收到MH膠后請進(jìn)行分裝保存以便后期使用。

2、R緩沖溶液 (0.25X)制備步驟:先以37 ℃ 水浴回溫DMEM培養(yǎng)液，取1.25 毫升R緩沖溶液 (1X)與3.75 毫升回溫的DMEM培養(yǎng)液，充分混合均勻。

注3:若要配置高硬度膠體，建議可制備R緩沖溶液 (0.5X)濃度。當(dāng)R緩沖溶液濃度越高，所調(diào)配的膠體硬度則越高。R緩沖溶液 (0.5X) 制備步驟:取2.5 毫升R緩沖溶液 (1X)與2.5毫升DMEM培養(yǎng)液，充分混合均勻。

注4:R緩沖溶液在使用前請放置37 ℃ 水浴槽內(nèi)。若未使用完畢，可保存于4 ℃ 冰箱，期限為一周。

 （3）膠體準(zhǔn)備步驟

1、取適量癌細(xì)胞株懸浮液，經(jīng)離心后收集細(xì)胞沉淀，再與R緩沖溶液 (0.25X)均勻混合，使細(xì)胞濃度為 4*10⁶ cells/mL。

2、MH (1X)膠與步驟1的含R緩沖溶液  (0.25X)的癌細(xì)胞混合液，以1:1比例混合均勻，癌細(xì)胞株懸浮液最

濃度為2*10⁶ cells/mL。例如:5 毫升MH (1X) 膠與5 毫升含R緩沖溶液(0.25X)的癌細(xì)胞混合液，充分混合均勻。R緩沖溶液用于MH膠的凝膠反應(yīng)

注5:若要配置高硬度膠體，建議可使用MH (1X)膠與含R緩沖溶液(0.5X)的癌細(xì)胞混合液，以1:1比例混合均勻。

3、選用23-26 G的針頭 (建議選用24 G)及1 毫升針筒，抽取步驟2含癌細(xì)胞株的混合膠體，室溫25 ℃下進(jìn)行抽取操作，抽取所需注射體積(例如:0.2 毫升)，再于室溫下靜置至少10分鐘。

注6:若抽取時發(fā)生塞針狀態(tài)，可先把針頭拔掉，以針筒進(jìn)行抽取，建議一次抽取配置好所需針筒數(shù)量，避免步驟2溶液過度凝膠，發(fā)生塞針現(xiàn)象。

4、將抽取完成的步驟3注射針筒，室溫運送至動物房。

 【動物房材料及動物注射準(zhǔn)備步驟】

(1)材料準(zhǔn)備步驟

1.含 MH 膠與 R 緩沖溶液的癌細(xì)胞株混合膠體的注射針筒

2.皮膚消毒劑 (例如 :  酒精)

3.手套

4.建議以 5-6 周齡的實驗免疫缺陷小鼠進(jìn)行實驗

5.麻醉老鼠的試劑

(2)動物注射準(zhǔn)備步驟

1.室溫下直接注射。將含 MH 膠與 R 緩沖溶液的癌細(xì)胞株混合膠體的注射針筒，以皮下注射方式，注射實驗所需的體積至實驗鼠上。

注 1:建議皮下注射量為 0.2 毫升，實際狀況依需求而定。注射時若因凝膠緣故而阻力變大，需緩慢注射避免針頭噴落。

注 2:以大腸直腸癌細(xì)胞株為例，注射細(xì)胞濃度及體積建議如下。

 2.  每周觀察量測接種的腫瘤尺寸，在飼養(yǎng) 4-5 周后可摘取腫瘤組織。

注 3:以大腸直腸癌細(xì)胞株 HCT 116 為例，小鼠于飼養(yǎng) 4  周后，腫瘤組織大小可達(dá) 1000mm³ 以上。

補充材料

圖一:以大腸直腸癌細(xì)胞株 HCT 116，進(jìn)行小鼠皮下成瘤試驗。 

1.無生長因子膠體設(shè)計，避免生長因子干擾實驗，降低實驗誤差，使小鼠皮下成瘤體積大小更加一致。

2.MH 膠維持與 Matrigel 相似的腫瘤生長速度，于 4 周后腫瘤組織大小可達(dá) 1000 mm3 以上，可進(jìn)行摘取。于 3 周后，即可進(jìn)行藥物測試。

 參考文獻(xiàn)

1.A.T., Elizabeth, et al., Bio Protoc. 2017, 7(1). doi: 10.21769/BioProtoc.2100, (2017)

2.Yuqin Yao, et al., Oncol Lett. 2015, 10(6). doi: 10.3892/ol.2015.3764, (2015).

3.Marrella, A. et al., Polymers 2018, 10(4), 380. doi: 10.3390/polym10040380, (2018).